裸鼠成瘤實驗

hjc黄金城藥理學服務為您提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等試驗，詳情可聯係獲得。郵箱：marketing@yakkaa.com 電話：021 58591500。

裸鼠服務流程

    1、操作方案設計
2、方法開發
3、細胞製備
4、裸鼠成瘤

裸鼠皮下成瘤動物實驗方法 

分組:SW620細胞組、SW620轉染無關siRNA組、SW620轉染目的基因（每組6隻）。 
細胞準備及注射裸鼠方法： 到動物室準備實驗。 

取出未作處理的小鼠和處理後小鼠用鼠籠，順序擺放在超淨台中。選體形較大的小鼠稱重，以3μl/g劑量，腹腔注射10％水合氯醛麻醉小鼠。約5分鍾，小鼠開始進入安靜狀態，將其仰臥固定。切忌麻醉劑過量使用。 

(1)鋪白布於鼠板上，仰臥位固定小鼠四爪，碘伏棉球消毒腹側麵上至頸部、下至腹股溝、後至腋後線。消毒兩次。鋪手術巾於小鼠上，在其左側剪口（4*4cm），暴露其左側腹部, 用碘伏消毒一次。在左側肋弓下緣1cm處向下剪開2cm皮膚，暴露腹壁肌肉，鑷子牽拉腹壁肌肉，避開腹腔內脾髒，剪開腹壁肌肉，暴露內髒。用棉簽蘸PBS，撥出脾髒下極，切忌牽拉，以免損傷脾髒和胰腺。 
(2)找到脾髒同時，用25微升Matrigel混合於細胞管中，打懸細胞沉澱，使細胞分散均勻成單細胞懸液。用BD針吸淨EP管中的單細胞懸液，稍退針芯，打出氣泡，在脾髒下極內側（凹麵）進針向脾門方向約2mm開始注射細胞，注射完畢停留約30秒鍾，緩慢退出針，以防細胞滲出。同時用蘸PBS的棉球壓迫周圍出血點止血。 
(3)用注射器吸取慶大黴素注射液（用生理鹽水250：1稀釋）約400微升，注入腹腔，棉球蘸幹皮緣滲出的抗生素。開始縫合腹壁肌肉（連續縫合4針）。再次用注射器吸取慶大黴素注射液約400微升衝洗縫合口，棉球蘸幹。縫合皮膚（間斷縫合4針）。碘伏棉球消毒縫合口。撤除固定，使小鼠處於自然體位，放於鼠籠中。 
(4)所有細胞注射完畢，剪耳標記，記錄剪耳標記及分組情況。 
Day5-7：注意小鼠的狀態，及時發現小鼠是否有因手術刺激、胰腺損傷、感染等死亡的情況。 
Day42：頸椎離斷，處死小鼠，解剖屍體，觀察脾髒腫瘤生長狀況，肝髒、肺髒及其他器官是否有轉移瘤形成。所有可疑組織均做好標記，拍照，若有表麵結節，計數後，凍於液氮中。視結果情況用10%甲醛溶液固定過夜後做病理。 

裸鼠皮下成瘤實驗技巧

1、細胞狀態是成瘤實驗的關鍵，所以細胞生長狀態一定要好，取處於對數生長期的細胞，細胞達80-90%左右密度為宜;收集細胞前一天晚上更換新鮮培養基。
2、胰酶消化細胞後用預冷的PBS洗兩遍，目的為去除細胞中的血清。
3、用PBS或者無血清培養基吹打細胞沉澱至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細胞量為1-5×10^6個細胞/支，接種體積為0.1ml，因此細胞懸液的濃度為1-5×10^7個細胞/ml。
4、細胞消化後應盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時內完成，途中將細胞懸液放在冰上降低細胞的代謝。
5、選擇的裸鼠一般在5-8周齡，體重18-20g左右，種植部位選擇血供豐富區域，如腋窩中後部、腹股溝中上部。
6、接種前用槍將細胞懸液充分的吹散，防止細胞成團而降低細胞成活率。
7、接種時，針頭在皮下進針深一點，約1cm深，減少注射後細胞懸液從針眼溢出。
8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。

9、接種後一周左右可以見到皮下開始出現腫塊。
10、根據腫瘤細胞的特性和接種細胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤不宜生長過大，一般不要超過1000mm3 ，腫瘤負荷過大常常會以違背動物倫理而被雜誌社刁難(因為這個問題悲慘地被plos one拒過稿）。
11、腫瘤大小測量一般為1周兩次，遊標卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長軸，b為短軸)。
12、皮下瘤取下後一部分凍液氮用作以後提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。

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