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步驟 | 實驗內容 | 實驗時間 | 備注 |
---|---|---|---|
1 | 重組質粒構建 | 2 周 | 可選擇不同載體,不同標簽His, Trx , GST, SUMO… |
2 | 重組表達測試 | 1周 | 不同表達菌株可選 |
3 | 可溶性表達測試 | 1-2周 | 不同誘導劑,誘導溫度,也可重新考慮基於蛋白質 結構點突變或者缺失突變的突變體構建 |
4 | 小規模蛋白表達和純化 | 1-2周 | 若為包涵體表達,時間和方法將有所調整 |
5 | 大規模蛋白表達和純化 | 根據表達體積商定 | 可選擇搖瓶或者發酵罐培養 |
您可根據實驗需求選擇上述任一實驗內容,或相關實驗內容的組合;
純化時選用親和純化、離子柱純化、疏水填料純化和分子篩純化; 蛋白本身特性,表達係統的選擇會影響最終蛋白的純度和活性。