hjc黄金城原位雜交技術服務

定義：原位雜交（insituhybridization）屬於分子雜交的一種，是一種將標記探針直接於組織或細胞中的待測核酸雜交，並結合免疫細胞化學的原理使用合適的檢測係統，從而對目標核酸序列進行精確定量定位的方法。

原位雜交術（in situ hybridization)

在研究DNA分子複製原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，能過氫鍵結合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA雙鍵分子的特點，應帶有標記的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質)DAN或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸。(RNA或DNA）片段進行雜交，然後可用放射自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DAN的存在與定位；用原位雜交術，可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。 此方法有很高的敏感性和特異性，可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調節機製。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

發展進程：1969年Pardue和Gall最先研發了此項技術，當時可用的唯一標記物是放射性同位素，放射自顯影技術顯然成為探針序列檢測的方法。但放射性標記探針由於安全要求措施嚴格、有效期短、顯影時間長及放射衰變引發的低分辨率等因素，原位雜交技術的發展和應用大受限製。直至非放射性標記探針的出現，徹底排除原位雜交中遇到的種種阻礙，使得該技術得到廣泛應用。

方法：非放射性原位雜交技術根據標記探針的類型分為兩種。直接檢測法（以熒光素直接標記探針）和間接檢測法（以地高辛或生物素標記的核苷酸作為底物，通過PCR合成標記探針。）

原位雜交技術分類

①基因組原位雜交技術：主要是利用物種之間DNA同源性的差異，用另一物種的基因組DNA以適當的濃度作封阻，在靶染色體上進行原位雜交。
②熒光原位雜交技術：利用熒光標記的核酸片段為探針，與染色體上或DNA顯微切片上的特異fl-N：~行雜交，通過熒光檢測係統(熒光顯微鏡)檢測信號DNA序列在染色體或DNA顯微切片上的目的DNA序列，進而確定其雜交位點。
③多彩色熒光原位雜交技術：是在熒光原位雜交技術的基礎上發展起來的一種新技術，它用幾種不同顏色的熒光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交，能同時檢測多個靶位，各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同，呈現多種色彩，因而被稱為多彩色熒光原位雜交。

④原位PCR：是常規的原位雜交技術與PCR技術的有機結合，即通過PCR技術對靶核酸序列在染色體上或組織細胞內進行原位擴增使其拷貝數增加，然後通過原位雜交技術進行檢測，從而對靶核酸序列進行定性、定位和定量分析。原位PCR技術大大提高了原位雜交技術的靈敏度和專一性，可用於低拷貝甚至單拷貝的基因定位，為原位雜交技術的發展提供了更廣闊的發展前景。

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