由於腫瘤機製的多樣性和複雜性，聯合治療已經成為腫瘤治療研究的趨勢和共識。本文將溶瘤病毒與
CAR-T免疫療法結合，所產生的驚人效果令人振奮。hjc黄金城緊跟國際免疫腫瘤藥物研發趨勢，推進國內外客戶新藥研發進程，拓寬其在創新藥物熱點領域的發展布局。公司在腫瘤模型方麵，尤其是免疫腫瘤動物模型評價係統領域，引進國際先進的
PET-CT影像係統、放療輻射係統、IVIS小動物成像係統，多通道流式細胞分析儀等精密儀器設備，開發藥物研發關鍵技術，係統性地建立了超過250種
腫瘤模型。公司長期為國際大型抗腫瘤藥物公司武田製藥等客戶提供抗腫瘤藥物研究服務。
作為兩種目前極為熱門的腫瘤免疫手段，溶瘤病毒和CAR-T療法（嵌合抗原受體T細胞免疫療法）近年來被很多公司和科研中心所青睞，研究進展也不斷更新。然而在發展中的CAR-T療法由於無法限製性的轉移識別腫瘤抗原，並且很難克服腫瘤微環境對CAR-T細胞的影響，因此關於CAR-T的研究在安全性上有所顧慮，並且無法將治療的領域延伸至實體瘤。
該研究的作者之一Saul Priceman教授說，“第一，實體瘤上，適合T細胞用CAR重定向的靶標有限。第二，實體瘤被所謂的免疫抑製性腫瘤微環境包圍，當一種CAR-T細胞試圖進入腫瘤，存活下來並殺死癌細胞時，會因為這種屏障而無法有效發揮作用。溶瘤病毒能夠突破這一屏障。”
反觀溶瘤病毒，因其可以特異性的靶向腫瘤，具備良好的免疫原性和攜帶外源基因定向轉入腫瘤的能力，已成為針對實體腫瘤的有前景的治療手段。作為首個批準臨床使用的溶瘤病毒類藥物T-VEC，研究發現它可以將可溶性的腫瘤抗原暴露並且引導宿主的抗腫瘤免疫反應。
文章的研究正是利用了這一點，將溶瘤病毒作為CAR-T細胞進軍實體瘤的”司機"。他們通過基因工程改造了一種溶瘤病毒，使其進入腫瘤細胞，迫使細胞在表麵表達截短的CD19（CD19t）。文中的實驗顯示，這種溶瘤病毒（被稱為OV19t）能在三陰性乳腺癌細胞係以及胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌和頭頸癌、腦腫瘤細胞中起效。
01 溶瘤病毒成功將CD19t遞送給實體瘤細胞（體外）
研究人員使用嵌合PSE啟動子和CD19t的骨肉瘤溶瘤病毒去大範圍感染不同種類的實體瘤。為了能夠更直觀的表達溶瘤病毒轉染癌細胞的能力和癌細胞表麵CD19t的表達，研究人員對腫瘤細胞進行了染色。用溶瘤病毒感染癌細胞後，癌細胞在其表麵表達了豐富的CD19。進一步，研究人員利用流式細胞術量化測量了不同時間段裏腫瘤細胞表麵CD19t的表達，發現在轉染72小時後，仍有70%的腫瘤細胞可以檢測到CD19t的表達，這就給CAR-T細胞的特異性識別和靶向提供了充足的時間。
之後，研究人員在來自多種實體瘤（包括胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌）的細胞中測試了「OV19t+CD19-CAR-T」聯合療法。
（圖片來源：Science Translational Medicine）
02 實體瘤表達的CD19t能夠重新引導CD19-CAR-T細胞的活動和細胞毒性（體外）
在這一步的驗證中，研究人員將感染了OV19t的腫瘤細胞和CD19-CAR T細胞共孵育，並用T細胞表麵CD25和4-1BB的表達來指征T細胞的激活。結果表明，溶瘤病毒能夠多次為T細胞呈遞抗原，並且介導CAR T細胞對腫瘤的免疫反應。
（圖片來源：Science Translational Medicine）
03 非臨床研究中動物模型的抑癌效力測試（體內）
接著，研究人員繼續在小鼠腫瘤模型中嚐試這種策略。他們發現，將OV19t與CAR-T細胞聯合產生了強大的協同效應，治愈了超過一半的小鼠，~60%的小鼠完全緩解，而僅22%單獨接受OV19t治療的小鼠腫瘤完全消退。
研究者們還發現，在接受聯合治療的小鼠中，OV19t會持續向癌細胞擴散，被殺死的腫瘤細胞會釋放額外的病毒拷貝，使鄰近的腫瘤細胞表達CD19，導致了顯著更強的腫瘤細胞殺傷活性。更重要的是，當用癌細胞再次挑戰被治愈的小鼠時，未有新的腫瘤形成，表明這種病毒-CAR-T聯合方案幫助建立了腫瘤特異性免疫記憶，可阻止癌症複發。
04 CD19-CAR T療法接到的腫瘤殺傷可以釋放溶瘤病毒OV19t
為了考察這種方法是否可以克服溶瘤病毒對實體瘤的次優或不均勻感染，實驗人員測試了殺傷後的腫瘤細胞是否可以在實體瘤的環境中釋放溶瘤病毒片段。結果顯示，CD19-CAR-T細胞介導的腫瘤殺傷促進了病毒顆粒的釋放以及持續的腫瘤細胞感染。除了表達CD19t，研究還證實，引入病毒逆轉了腫瘤惡劣的微環境，使其更容易接受CAR-T細胞治療。
這一發現為實體瘤的治療方案提供了新的思路和希望，整合CAR-T療法和溶瘤病毒帶來更好的療效。hjc黄金城也將持續關注腫瘤免疫療法的新進展和新思路，並利用不斷完善的腫瘤免疫療法評價平台，助力研發。
參考文獻： Park AK, Fong Y, Kim SI, Yang J, Murad JP, Lu J, Jeang B, Chang WC, Chen NG, Thomas SH, Forman SJ, Priceman SJ. Effective combination immunotherapy using oncolytic viruses to deliver CAR targets to solid tumors. Sci Transl Med. 2020 Sep 2;12(559):eaaz1863. doi: 10.1126/scitranslmed.aaz1863. PMID: 32878978.
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