細胞轉染技術服務

細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，轉染已經成為研究和控製真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。

技術內容：將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞 

研究內容：研究和控製真核細胞基因功能 

應用：基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗

細胞轉染的分類

1、瞬時轉染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但通常隻持續幾天，多用於啟動子和其他調控原件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染後24-72小時內分析結果，常常用到一些報告係統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

目的：快速分析

篩選方法：抗生素抗性

表達持續時間：隨細胞分裂而稀釋至丟失48－72小時 

目的DNA與宿主染色體：未整合

2、穩定轉染：外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種遊離體存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整個率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1、104轉染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記，如來氨丙基轉移酶，潮酶素B磷酸轉移酶，胸苷激酶等反複篩選，得到穩定轉染的同源細胞係。

目的：為獲得穩定表達外源基因的單細胞克隆 

篩選方法：抗生素抗性

表達持續時間：隨宿主細胞本身基因組一樣複製，轉錄，翻譯，並被穩定遺傳 

目的DNA與宿主染色體：未整合

常見細胞轉染方法介紹

1、DEAE-葡聚糖法

是最早應用哺乳動物細胞轉染的試劑之一。DEAE-葡聚糖是陽離子多聚體,它與帶負電的核酸結合後接近細胞膜而被攝取。DEAE一葡聚糖轉染已成功地應用於瞬時開始，但用於穩定轉染卻不可靠。

2、磷酸鈣共沉澱轉染法

由於試劑易得、價格便宜而被廣泛用於瞬時轉染和穩定染的研究。方法是，先將DNA和氯化鈣混合，然後加人到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉澱，後把含有沉澱的混懸液加到培養的細胞上，通過胞膜的內吞作用攝人DNA。

3、脂質體介導法（目前應用最廣泛）

原理：陽離子脂質體試劑與DNA混合後，形成一種穩定的脂質雙層複合物，DNA被包在脂質體中間，這種脂質雙層複合物可直接加到培養的細胞中，脂質體粘附到細胞表麵並與細胞膜融合，DNA被釋放到胞漿中。

【主要應用】:瞬時轉染  穩定轉染. 

【特點】：使用方法簡單，可攜帶大片段DNA，通用於各種類型的裸露DNA或RNA，能轉染各種類型的細胞，沒有免疫原性。雖在體外基因轉染中有很高的效率，但在體內，能被血清清除，並在肺組織內累積，誘發強烈的抗炎反應，導致高水平的毒性，很大程度上應用受限製。

4、物理方法(電穿孔、顯微注射及基因槍)

脂質體介導法實驗方法介紹

細胞轉染Lipofectamine 2000轉染試劑：以HEK193細胞為例：

轉染前一天，將細胞鋪到培養皿中，

加入有血清無雙抗的培養基（15ml）；

24小時候換上無血清無雙抗的培養基12ml；

將所需的質粒用1.5ml無血清無雙抗的培養基稀釋；取40ul的Lipofectamine 2000加入無血清無雙抗的培養基稀釋，室溫放置5min；

5min後將質粒和Lipofectamine 2000混合在一起，室溫放置20min後加入培養皿中，4h後換上完全培養基48h培養；

注：24h看一次，如果培養基變顏色換培養基。

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