流式細胞凋亡檢測

流式細胞術(flowcytometry，FCM)是以流式細胞儀為檢測手段的一項能快速、精確的對單個細胞理化特性進行多參數定量分析和分選的新技術。流式細胞儀的發展綜合了激光技術、計算機技術、顯微熒光光度測定技術、流體噴射技術、分子生物學和免疫學等多門學科的知識。流式細胞術最大的特點是能在保持細胞及細胞器或微粒的結構及功能不被破壞的狀態下，通過熒光探針的協助，從分子水平上獲取多種信號對細胞進行定量分析或純化分選。為細胞分析提供了全新的手段。
方法：散射光的測定、熒光測量、細胞分選等。
常用：細胞凋亡、周期、細胞抗體檢測、分選細胞等等。

流式細胞凋亡其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等，其中細胞核的改變最具特征性，主要包括以下幾個方麵：

1.細胞核的改變

由於凋亡細胞核的改變，造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性發生改變。研究表明，用各種染色體熒光染料對經固定的凋亡細胞進行染色，其DNA可染性降低。許多學者把這種DNA可染性的降低認為是凋亡細胞的標誌之一。

2.光散射特性

凋亡細胞形態上的改變影響它們的光散射特性。在流式細胞儀上，前散射光與細胞的大小有關，而側散射光反映的是光在細胞內的折射作用，與細胞內的顆粒多少有關。在細胞凋亡時，細胞固縮，體積變小，故前散射光降低，這一特性往往被認為是凋亡細胞的特點之一。此外細胞凋亡時由於染色體降解，核破裂形成，細胞內顆粒往往增多，故凋亡細胞側散射光常增加。細胞壞死時，由於細胞腫脹，其前散射光增大；側散射光在細胞壞死時也增大，因此可根據前散射光和側散射光區別凋亡細胞和壞死細胞。但需要注意的是，根據前散射光和側散射光判斷凋亡細胞的可靠性受被檢測細胞形態上的均一性和核胞漿比率影響很大。因此在某些淋巴細胞凋亡中，用光散射特性檢測凋亡的可靠性較好，而在腫瘤細胞凋亡中，其可靠性就較差。根據光散射特性檢測凋亡細胞最主要的優點是可以將光散射特性與細胞的表麵免疫熒光分析結合起來，用以區別經這些特殊處理發生選擇性凋亡的淋巴細胞亞型。也可用於活細胞的分類。

3.細胞凋亡時，其DNA可染性降低被認為是凋亡細胞的標誌之一，但這種DNA可染性降低也可能是因為DNA含量的降低，或者是因為DNA結構的改變使其與染料結合的能力發生改變所致。在分析結果時應該注意。